HP3 Hypoxyprobe Omni Kit
特異性的低氧探針（Hypoxyprobe-1）最初用於反映腫瘤細胞內的低氧梯度，正常細胞無表達或低表達。而在低氧的腫瘤細胞內可見高表達，並且隨低氧的程度越重而顏色越深。由於其很好的化學穩定性、水溶性，同時小分子的探針可以自由穿過血腦屏障而到達腦組織細胞及腦腫瘤細胞。

HP3 Hypoxyprobe Omni Kit 缺氧探針檢測試劑盒

公司簡介：

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）是一家致力於(yu) 為(wei) 氧代謝紊亂(luan) 引起的惡性和正常組織疾病提供診斷和治療工具的小公司。公司位於(yu) 美國馬塞諸薩州伯靈頓（121 Middlesex Turnpike, Burlington, Massachusetts, USA 01803），屬於(yu) 美國國際天然藥物公司（Natural Pharmacia International, Inc.，NPI）缺氧探針部門的衍生公司。 Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）的成立起源於(yu) James Raleigh教授（任職於(yu) 查珀爾希爾（Chapel Hill）北卡羅萊納大學放射腫瘤學部門）和NPI（當時位於(yu) 北卡羅萊納Research Triangle Park）之間的合作。起初的合作著重於(yu) 腫瘤缺氧的臨(lin) 床研究。NPI大規模生產(chan) 缺氧探針Pimonidazole HCl，而James Raleigh教授提供Patent保護的抗體(ti) ，特異性檢測人腫瘤上結合Pimonidazole的缺氧細胞。總體(ti) 來說，使用Pimonidazole HCl作為(wei) 缺氧標記物，用在狗、大小鼠上的臨(lin) 床前研究越來越受科研圈的關(guan) 注。2002年NPI授權五年Patent給Chemicon公司銷售缺氧探針試劑用於(yu) 動物研究。2006年預測到市場對缺氧探針試劑的擴張需求，NPI終止chemicon授權並成立Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）以開發更優(you) 秀且更寬廣的試劑用於(yu) 動物和臨(lin) 床研究。如今的Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）專(zhuan) 注於(yu) 研發非侵略性的缺氧標誌物（Hypoxia maker）和缺氧依賴性的細胞因子，所有產(chan) 品皆基於(yu) Pimonidazole核心結構來開發。

檢測原理：
低氧標誌物測定是利用還原硝基有選擇性結合乏氧細胞的能力而形成的一種從(cong) 細胞水平測定腫瘤乏氧的技術，其原理是：腫瘤乏氧細胞還原能力強，當具有電子親(qin) 合力的硝基咪唑主動擴散透過細胞脂膜，在細胞內(nei) 硝基還原酶作用下，硝基被還原，還原產(chan) 物與(yu) 大分子物質不可逆結合，滯留在組織內(nei) 。而正常含氧細胞親(qin) 電子硝基咪唑還原產(chan) 物立即被氧化，從(cong) 而用硝基咪唑類化合物在腫瘤內(nei) 的代謝程度來反映腫瘤的乏氧。Pimonidazole是新型的乏氧細胞標記物，HPI公司擁有硝基咪唑類化合物特異性抗體(ti) ，該抗體(ti) 為(wei) 公司patent技術，可用於(yu) 免疫組織化學、酶聯免疫吸附試驗和流式細胞分析檢測。

特色產(chan) 品：
HP3 Hypoxyprobe Omni Kit 缺氧探針檢測試劑盒

關(guan) 鍵詞：
Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）；Pimonidazole HCl；缺氧標誌物，（Hypoxia maker）；派諾硝唑，低氧探針，缺氧探針，乏氧探針

產(chan) 品應用：
特異性的低氧探針（Hypoxyprobe-1）最初用於(yu) 反映腫瘤細胞內(nei) 的低氧梯度，正常細胞無表達或低表達。而在低氧的腫瘤細胞內(nei) 可見高表達，並且隨低氧的程度越重而顏色越深。由於(yu) 其很好的化學穩定性、水溶性，同時小分子的探針可以自由穿過血腦屏障而到達腦組織細胞及腦腫瘤細胞。在實驗中應用低氧探針可以形象直觀的通過免疫組化來分析腦挫傷(shang) 周圍組織細胞低氧的範圍和程度，同時對實驗設備及器材要求較低，為(wei) 無創性實驗。

試劑盒組分：

試劑盒組分詳細描述：
1、Hypoxyprobe-1
Hypoxyprobe-1是2-硝基咪唑的替代物，其化學名和成分是（Pimonidazole HCl，派諾硝唑），分子量為(wei) 290.8，水溶性為(wei) 400mM（=116 mg/ml），紫外吸收（324nm）的吸光係數為(wei) 7020（0.9%生理鹽水）。Hypoxyprobe-1的粉末和溶液形式皆具化學穩定性。比如，固體(ti) 形式的Hypoxyprobe-1於(yu) 柔弱光線下室溫保存2年，UV和HPLC分析法評估無任何降解發生。溶於(yu) 0.9%生理鹽水的Hypoxyprobe-1，濃度100g/L置於(yu) 2-8℃保存4.5年，UV和HPLC分析法評估無任何降解發生。
2、Rabbit PAb2627AP抗體(ti)
Rabbit PAb2627AP是抗派諾硝唑探針的兔抗血清，以0.09 %NaN3和1 % BSA為(wei) 穩定劑。PAb2627AP的最佳稀釋度由各位研究者確定，但有研究發現1/50~1/ 200稀釋度的PAb2627AP與(yu) 過氧化物酶標記的山羊抗兔抗血清聯合使用時，可在小鼠腫瘤組織中產(chan) 生較強的免疫染色。

使用指南：

1.Animal Studies 動物研究

研究正常或腫瘤組織缺氧首先通過靜脈注射（intravenous infusion）、腹腔注射（intraperitoneal injection）或口服（oral ingestion）法給Hypoxyprobe-1溶液，劑量為(wei) 60mg/kg體(ti) 重。比如，25g小鼠的探針用量為(wei) 1.5mg/隻小鼠。（高達400mg/kg的劑量用於(yu) 小鼠無可見毒性或引起組織缺氧變化，但60mg/kg以低成本給予良好的染色結果）。
給藥後，Hypoxyprobe-1分布到包括大腦的所有組織，且僅(jin) 僅(jin) 在氧濃度≤14μM（相當於(yu) pO2=10mm Hg，37℃）的細胞內(nei) 與(yu) 蛋白質巰基形成複合物。除了腫瘤之外，正常組織如肝髒、腎髒和皮膚含pO2等於(yu) 或低於(yu) 10mm Hg的細胞，也會(hui) 結合Hypoxyprobe-1。
2、Tissue cultures 組織培養(yang)
通常情況下，細胞懸液置於(yu) 含100-200μM Hypoxyprobe-1的缺氧環境中孵育1-2h。之後細胞離心塗片、固定、FTIC-MAb1和anti-FITC chromogenic secondary染色。

常見問題解答（FAO）：

※Hypoxyprobe-1 探針如何溶解？
Pimonidazole HCl 是弱堿性鹽酸鹽，水溶性非常好，建議溶解於(yu) 116mg/ml 的中性生理鹽水。

※Pimonidazole HCl免疫劑量是多少？
對於(yu) 常規的小動物大小比較均一的，例如：小鼠或大鼠，我們(men) 推薦：探針用量：60 mg/kg。從(cong) 30 mg/kg 到 400 mg/kg在小鼠和大鼠都有用到，在此範圍內(nei) 的探針用量，不會(hui) 由於(yu) 血流效應而導致毒性或氧量的改變。對於(yu) 體(ti) 型較大個(ge) 體(ti) ，注射劑量依據個(ge) 體(ti) 的基礎表麵積而定。對於(yu) 人樣本，推薦劑量為(wei) ：0.5 mg/m2，狗樣本：0.28 mg/m2

※Pimonidazole HCl 探針是否能夠滲透進入低氧大腦組織或腦腫瘤組織？
Pimonidazole HCl可以自由滲透進入腦和腦腫瘤組織。

※探針注射後，多久可以進行收獲組織？
 對於(yu) 人體(ti) 組織的一些研究表明，收獲組織需要在免疫後15-24小時後檢查。探針在血漿中的半衰期是5小時，因此16-24小時相當於(yu) 3-5個(ge) 探針半衰期循環。也就是說：在組織檢查時：大概有1/8 到1/32 的探針仍存在，冷固定後，這樣減少了非特異性染色，且低背景。
另外關(guan) 於(yu) 人類腫瘤研究表明，活組織檢查應該在免疫後，1.5-4小時，然後組織及時轉到液氮固定。這種方法背景也較低。小鼠血漿中的探針半衰期在0.25小時。這種情況下，采取1-2小時收獲組織然後采取快速固定方法，可有效的消除背景。