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正確保存抗體

更新時間:2015-04-02點擊次數:2108

正確保存抗體(ti) ,你了解嗎?

  

抗體(ti) 保存得當與(yu) 否,直接決(jue) 定了抗體(ti) 的活性和使用效果!如果抗體(ti) 保存得當,大部分抗體(ti) 活性都可以維持數月甚至數年。

請謹記!無論何時(請按照說明書(shu) 推薦的保存條件正確保存抗體(ti)

1. 收到抗體(ti) 後請務必在12000rpm離心1-5分鍾後再打開管蓋進行分裝和保存(如果抗體(ti) 體(ti) 積小於(yu) 50ul,請延長離心時間至5分鍾,以保證全部抗體(ti) 均離心下來)!為(wei) 了昂貴&珍貴的抗體(ti) ,請看清是12000rpm

2. 對於(yu) 大部分抗體(ti) ,比較合適的保存方式是分裝後保存在 -20℃ or -80℃ 。對絕大多數抗體(ti) 來說,保存在-20℃是*足夠了。沒有任何證據顯示保存在-80℃會(hui) 有更多的好處!

    分裝可以zui大程度的降低反複凍融對抗體(ti) 活性的損害,同時也降低了由於(yu) 多次從(cong) 同一管中吸取抗體(ti) 造成的汙染可能性。分裝的量以一次實驗用完為(wei) 好,zui少不能少於(yu) 10ul每份。因為(wei) 分裝體(ti) 積越小,抗體(ti) 的濃度越可能會(hui) 受到蒸發以及管壁吸附的影響,複融後的分裝抗體(ti) 如果一次用不完,將剩餘(yu) 母液保存在4℃,避免再凍起來!抗體(ti) 工作液應該當天配製當天用完,在4℃盡量不要超過1天。避免將抗體(ti) 保存在自動除霜冰箱中。盡量將抗體(ti) 保存在冰箱裏層,而不是門上。

3. 大部分抗體(ti) 收到後4℃短暫保存1-2周對抗體(ti) 活性是沒有影響的。如果抗體(ti) 很快(1-2周)會(hui) 使用,推薦在4℃保存,這是為(wei) 了避免反複凍融對抗體(ti) 活性的損害。如果要長期保存則是在-20℃ or -80℃。zui關(guan) 鍵的一點是要根據說明書(shu) 推薦的方式來正確的保存抗體(ti) !

但是,腹水形式的產(chan) 品請在收到後立即凍起來!因為(wei) 該類產(chan) 品含有大量的蛋白酶,長期在4℃保存會(hui) 導致抗體(ti) 的降解!

4. 大部分抗體(ti) 的運輸條件:一般的運輸過程需要1-2周的時間,所以是在4℃的條件下來完成的。4℃運輸zui主要的目的是為(wei) 了避免反複凍融對抗體(ti) 活性的損害(如果使用幹冰運輸,那麽(me) 收到時抗體(ti) 是凍起來的,為(wei) 了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程)。所以運輸過程中避免幹冰運輸!

特殊抗體(ti) 的保存條件;

酶聯抗體(ti) :永遠保存在4℃,避免凍起來。否則會(hui) 導致酶活性的下降或者喪(sang) 失

偶聯抗體(ti) :所有偶聯抗體(ti) 都需要在棕色管中或使用錫箔紙避光4℃保存。尤其是熒光抗體(ti) ,對光極為(wei) 敏感,因此在所有的實驗階段也是要避光操作的!

IgG3的同型對照:永遠保存在4℃,避免凍起來。因為(wei) 如果出現凍融過程,該抗體(ti) 非常容易形成多聚體(ti)

無論是保存還是運輸,避免反複凍融,反複凍融會(hui) 導致抗體(ti) 變性,導致多聚體(ti) 形成,從(cong) 而降低抗體(ti) 的結合能力!

抗體(ti) 保存其它相關(guan) 信息:

關(guan) 於(yu) 加入甘油保存

有些人會(hui) 加50%的甘油到抗體(ti) 中來避免反複凍融,甘油在-20℃ 會(hui) 降低冰點。這對很多抗體(ti) 可能是可行的。加入甘油的溶液不建議在-80℃保存,因為(wei) 這已經超過了甘油的冰點。如果您要加入甘油來保存抗體(ti) 的話,請謹慎注意無菌操作,避免汙染!

關(guan) 於(yu) 蛋白保護劑:

蛋白在高濃度時更不容易降解(1 mg/ml 或者更高),這就是為(wei) 什麽(me) 在抗體(ti) 中加入BSA之類作為(wei) 穩定劑的原因了;另一方麵,加入的蛋白穩定劑也可以減少抗體(ti) 由於(yu) 管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體(ti) 要用來標記的話,則不能加入蛋白穩定劑,因為(wei) 這些穩定劑會(hui) 和抗體(ti) 一起競爭(zheng) 結合標記物。

關(guan) 於(yu) *(sodium azide)的使用:

為(wei) 了防止微生物汙染,*經常被加入到抗體(ti) 中(終濃度0.02% (w/v))。很多抗體(ti) 已經含有了0.02%-0.05%的*,在說明書(shu) 的“Storage buffer"中有標明的。

在下述情況中不能使用*:

如果抗體(ti) 用於(yu) 染色或處理活細胞,用於(yu) 體(ti) 內(nei) 研究:

*在抵抗微生物的同時,對其它大部分有機物也是有毒的,因為(wei) 它阻斷了線粒體(ti) 的cytochrome electron transport system.

要偶聯帶有氨基基團的抗體(ti) :

*會(hui) 幹擾任何含有氨基基團的偶聯,因此在進行偶聯之前,應將*去除。偶聯後的抗體(ti) 可以加入*保存,但是濃度隻能是0.01%。對於(yu) 需要偶聯的抗體(ti) ,thimerosal (merthiolate)可以替代*作為(wei) 保護劑!