BD BiocoatTM 細胞檢測相關係統

BD Biocoat^TM 細胞檢測相關(guan) 係統

Biocoat腫瘤侵襲係統

BD 產(chan) 品貨號：354166, 354165

儲(chu) 存和運輸：-20度儲(chu) 存，幹冰運輸。

使用指南:

BD Biocoat^TM 腫瘤侵襲係統由包被Matrigel基質的特殊材質BD FluoroBlok 熒光屏蔽8.0μm PET膜的培養(yang) 小室組合而成。BD Biocoat^TM 腫瘤侵襲係統具有以下特點：提高腫瘤細胞侵襲實驗的通量；自動化非破壞式的熒光檢測；節約抗腫瘤轉移藥物篩選的時間和勞動力；高度可重複性：平均z’=0.7(24孔)；平均z’=0.66(96孔)；使用簡便：無需反複取液和操作，僅(jin) 需加入細胞、標記物，然後直接讀板。

操作過程:

凍融

從(cong) -20℃冰箱中取出產(chan) 品，使其自然升溫到室溫。取出培養(yang) 板在細胞小室內(nei) 加入到500μL 37℃預熱的PBS，37℃無CO2環境下孵育2小時。解凍後，小心去除小室內(nei) 的培養(yang) 基，避免破壞Matrigel基質膜。

BD鈣黃綠素Calcein AM熒光染色劑後標記法

細胞通過侵襲消化基質膜後遷移到下小室，采用熒光標記定量細胞。細胞的侵襲能力用終點計算法計算得到。對於(yu) 采用實時動力曲線的計算，推薦使用前標記法。

2.1 如步驟1準備培養(yang) 板。

2.2 胰酶消化細胞單層後製得細胞懸液，溶於(yu) 無血清DMEM培養(yang) 基，推薦濃度為(wei) 5×104 cells/mL。

2.3 上小室中加入500μL細胞懸液（2×104 cells）。

2.4 通過進樣口在下小室中加入750μL誘導劑。

2.5 在37℃，5%CO2 條件下孵育培養(yang) 板和對照板20-22小時（由細胞類型決(jue) 定）。

2.6 孵育後，小心去除上小室中的培養(yang) 基。避免破壞Matrigel基質膜。可以通過反扣住培養(yang) 板，輕輕拍打，以使培養(yang) 基的傾(qing) 倒。

2.7 將培養(yang) 小室轉移到另一塊24孔板中，該孔板含有0.5 mL每孔的4μg/mL 鈣黃綠素（溶於(yu) HBSS）。在37℃，5%CO2的環境下培養(yang) 一小時。

3、DilC12（3）熒光染色劑預標記法

細胞接種於(yu) 孔板之前先用染色劑標記，可用於(yu) 均一化實驗，所產(chan) 生的實時動力數據可揭示細胞通過基底膜侵襲的動力曲線，不需要分解和破壞各個(ge) 時間點。

3.1如1.所示凍融。

3.2 10μg/mLDilC12(3)溶解於(yu) 含10%FBS的DMEM中，37℃ 1小時標記單層細胞。

3.3 胰酶消化細胞單層，製備細胞懸液，溶於(yu) 無血清DMEM培養(yang) 基，濃度為(wei) 1×105 cells/mL。

3.4 上小室加入500μL細胞懸液（5×104cells）。

3.5通過進樣口在下小室加入750μL誘導劑。

3.6 在37℃，5%CO2環境下孵育培養(yang) 板和對照板18-24小時（由細胞類型決(jue) 定）。在549激發波長和565nm發射波長條件下進行熒光讀數。

4、數據計算

侵襲率%=受趨化劑誘導通過Matrigel基質膜的細胞平均相對熒光值/受趨化劑誘導通過未包被FluoroBlok熒光膜的細胞平均相對熒光值×100

注意：數據可以用相對熒光值RFU或侵襲百分比表示，後者在標準化數據處理中更有用。背景扣除，計算平均背景值，將其從(cong) 各個(ge) 孔板中扣除。

自動化操作注意事項

BD Falcon FluoroBlok 24孔板培養(yang) 小室係統能適用於(yu) 自動化操作係統。蓋子可以用標準機械手取走，也可用吸力取走。為(wei) 了避免各孔間汙染，孔板設定為(wei) 一個(ge) 統一的方向。為(wei) 了與(yu) 培養(yang) 小室匹配，確保Falcon的商標均在2者上方，麵向同一個(ge) 方向。任何規格的槍頭都能達到小室的兩(liang) 邊。包括50μL，100μL，200μL，250μL，1000μL。