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細胞周期分析PI染色法

更新時間:2013-06-17點擊次數:2442

細胞周期流式檢測(PI染色法)

1. 收集細胞:若懸浮生長細胞離心棄培養(yang) 基,用PBS洗滌一次(建議用PBS + 1% FBS或PBS + 0.1% BSA),若是貼壁生長細胞,加入合適體(ti) 積的0.25%胰酶消化一分鍾左右(可顯微鏡觀察待細胞脫壁),吹起細胞後加入5ml 含10%血清的培養(yang) 基,終止作用,轉移細胞至15ml離心管中,300g 離心5分鍾,用PBS洗滌細胞一次;

2. 用PBS洗滌細胞一次,300g離心5分鍾後棄上清;

3. 用500ul PBS 重懸細胞,振蕩混勻後加入5ml 70%冷乙醇溶液(放置在-20度預冷的70%乙醇溶液),混勻後放置4度過夜(可放置一周);

4. 500g離心5分鍾後棄乙醇,用PBS懸浮細胞洗滌細胞一次;

5. 用PBS調節細胞濃度為(wei) 5 X 106個(ge) /ml,取500ul細胞懸液加入100ul  500ug/ml 的PI染色(用PBS配製500ug/ml的PI染色液),4°C避光放置30分鍾;

6. 加入100ul 煮沸過的RNase A (10mg/ml) 37度孵育30分鍾;

7. 混勻細胞後待上流式儀(yi) 獲取分析。

 

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