鈣離子熒光探針FLUO-3AM應用詳解

一、Fluo-3AM的理化性質 顏色及形狀：橘紅色液體(ti) 純度：，大於(yu) 95%（液相） 溶解性：溶於(yu) DMSO 吸收波長/發射波長：506nm /526nm（低/高鈣）   消散係數：86000/Mcm（506nm） 保存與(yu) 使用：粉狀的FLUO-3AM應保存於(yu) -20度以上。建議使用DMSO作為(wei) 溶媒。在溶解前，FLUO-3AM和DMSO均須放置至室溫。溶解過程可能會(hui) 比較慢。用無水的DMSO溶解的FLUO-3AM長期保存，應嚴(yan) 格密封，並保存於(yu) -20度。使用前，將保存液放置至室溫後再打開。可避免AM探針在長期的保存過程中水解。 二、Fluo-3AM的工作原理       FLUO-3廣泛用於(yu) 長波長的熒光鈣指示劑。其在506NM處被吸收，可以被氬離子激光的488nm激發光激發，便於(yu) 檢測。FLUO-3在沒有同鈣結合的情況下，無熒光產(chan) 生。但是，在與(yu) 鈣結合後，熒光（526nm）增強至少40倍。Fluo-3 AM是一種可以穿透細胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM的熒光非常弱，其熒光不會(hui) 隨鈣離子濃度升高而增強。Fluo-3 AM進入細胞後可以被細胞內(nei) 的酯酶剪切形成Fluo-3，從(cong) 而被滯留在細胞內(nei) 。Fluo-3可以和鈣離子結合，結合鈣離子後可以產(chan) 生較強的熒光，zui大激發波長為(wei) 506nm，zui大發射波長為(wei) 526nm。實際檢測時推薦使用的激發波長為(wei) 488nm左右，發射波長為(wei) 525-530nm。 三、Fluo-3AM的應用 1、過程概述 用於(yu) 細胞內(nei) 鈣離子檢測時，Fluo-3 AM的常用濃度為(wei) 0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-3 AM的適當溶液和細胞一起在20-37℃孵育15-60分鍾進行熒光探針裝載，隨後適當洗滌，洗滌後可以考慮適當再孵育20-30分鍾以確保Fluo-3 AM在細胞內(nei) *轉變成Fluo-3。然後在流式細胞儀(yi) 上進行檢測。 2、Fluo-3AM使用液的配置 100ug的Fluo-3AM，分子量是1219.9。按實際需要的摩爾濃度折算，無水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO儲(chu) 存液。如出現難溶現象，可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。 四、注意事項： 1、熒光染料有淬滅問題，應盡量避光保存； 2、實驗時注意個(ge) 人防護，戴手套、口罩； 五、應用舉(ju) 例 （一）配置與(yu) 貯存 1、基本信息  分子量：1129.9                  包裝單位重量：0.1mg  貯存濃度：5000μM/L             使用終濃度：5μM/L 2、貯存液的配製（5000μM/L）    按照說明書(shu) ，計算0.1mg 的摩爾數為(wei) 0.089μM ，則需加DMSO18uL，微量加樣器反複吹打混勻後分裝，按說明書(shu) 要求避光-20度冰凍保存。 （二）應用    每毫升細胞懸液中加入1 uL，則Fluo-3AM的使用終濃度為(wei) 5μM/L   訂購信息：   貨號 名稱 規格 價(jia) 格 50013 Fluo-3, AM ester, 10x100ug 1mg 300 50013 Fluo-3, AM ester, 100ug 100ug 2000