影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法

ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨(lin) 床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個(ge) 環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個(ge) 環節常出現問題的原因及解決(jue) 辦法總結於(yu) 下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。操作步驟 可能原因 解決(jue) 辦法 選擇試劑 選擇質量優(you) 良的檢測試劑，嚴(yan) 格按照試劑說明書(shu) 進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鍾。加 樣 1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣； 2.手工操作中，加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nei) 溫度較高時）； 3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。 1.標本為(wei) 血清：將血液先自然存放1-2小時後，再用3000rmp離心15分鍾；標本為(wei) 血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血後必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間後，3000rpm離心15分鍾；若在幾天內(nei) 檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置於(yu) -20℃的低溫冰箱內(nei) 。 2.加樣後及時放入孵箱。 3.加酶試劑後用吸水紙在酶標板表麵輕拭吸幹。 4.如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他後處理儀(yi) 器加酶試劑。 5.標本較多時，請分批操作。 孵 育 1.孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附於(yu) 孔壁，難於(yu) 清洗*； 2.孵育時間人為(wei) 延長，導致非特異性結合緊附於(yu) 反應孔周圍，難以清洗*。 1.貼封片或加蓋； 2.按說明步驟嚴(yan) 格控製操作時間。 洗 板 1.采用手工洗板,孔與(yu) 孔之間液體(ti) 交叉。 2.采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。 3.反應板過多造成洗板等待時間長。 1.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板後在吸水紙（選擇幹淨、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍幹； 2.合理安排，或多用幾台洗板機。 顯 色 1. 顯色劑配製後放置時間過長或使用過期顯色劑； 2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體(ti) 回流。 1. 顯色劑盡量在臨(lin) 用前配製，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2. 加樣時保持顯色劑不外流； 3.A、B液應避免接觸金屬器械。 終 止 加終止液時產(chan) 生較多氣泡，導致假陽性增加。加終止液時應避免產(chan) 生氣泡。 讀 板 讀板時板底不清潔。 應保證酶標板清潔。 全過程 1.整個(ge) 操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 2.實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。 在實際操作中，除了選擇優(you) 良試劑外，必須嚴(yan) 格按照操作步驟進行操作，同時作好室內(nei) 質控、室間質評，以嚴(yan) 謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內(nei) 已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀(yi) ，這對於(yu) 實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。