Tumor M2-PK 丙酮酸激酶PK盒子

ELISA檢測試劑盒操作說明書(shu)   簡介： 丙酮酸激酶PK是糖酵解途徑的一個(ge) 關(guan) 鍵酶，目前研究表明，幾乎所有不同組織來源的腫瘤均伴有丙酮酸激酶的異構重整體(ti) M2-PK的過度表達, 故稱為(wei) 腫瘤型M2-PK（Tumor M2-PK，Tu M2-PK）。在正常細胞中，M2-PK主要以三聚體(ti) 的形式存在，而在腫瘤細胞中，M2-PK大量表達並轉變為(wei) 主要以二聚體(ti) 的形式存在。三聚體(ti) 的M2-PK與(yu) 磷酸烯醇丙酮酸PEP親(qin) 和力很高，而二聚體(ti) 的M2-PK與(yu) PEP的親(qin) 和力則低的多，後者因此導致磷酸烯醇類物質的堆積，這有利於(yu) 腫瘤細胞進行無氧糖酵解。 Tu M2-PK的升高可見於(yu) 大多數癌症患者。盡管不同組織來源的腫瘤或同種腫瘤的不同階段，其血中M2-PK的平均水平存在著一定的差別，但作為(wei) 腫瘤標誌物，M2-PK是很有應用價(jia) 值的。尤其是腎癌，長期以來一直未發現較特異的腫瘤標誌物,M2-PK很可能成為(wei) 目前*可用於(yu) 臨(lin) 床診斷腎癌的生化指標。早在1993年，在Hamburg召開的（德國）第七界腫瘤標誌物研討會(hui) 上，Tu M2-PK就作為(wei) 一種新的腫瘤標誌物被提了出來。不過，比較其特異性而言，Tu M2-PK的靈敏度相對偏低。所以，用於(yu) 診斷和篩選腫瘤患者，Tu M2-PK還應與(yu) 其他有關(guan) 的腫瘤標誌物聯合檢測，以同時提高臨(lin) 床診斷的特異性和靈敏度。 本試劑盒能靈敏的高特異性地檢測出人體(ti) 血液內(nei) 的Tu M2-PK------一種可以用於(yu) 癌症的篩查、診斷和跟蹤治療的新的腫瘤標記物。 檢測原理： 本實驗采用雙抗體(ti) 夾心法原理，抗人M2-PK單抗包被於(yu) 酶標板上，標準品和EDTA血漿標本中的M2-PK就會(hui) 與(yu) 板上的單抗結合，被固定，通過洗板，將未結合的遊離成分洗去；再加入生物素化的M2-PK的抗體(ti) 和辣根過氧化物酶標記的親(qin) 合素。生物素和親(qin) 合素特異性結合；抗人M2-PK抗體(ti) 與(yu) 結合在單抗上的M2-PK結合而形成免疫複合物，遊離的成分被洗去。加入顯色劑，若反應孔中有M2-PK，辣根                                                                       1 過氧化物酶會(hui) 使無色的顯色劑顯藍色，加終止液變黃，在450nm處測OD值，M2-PK濃度與(yu) 所測OD450值成正比，可通過繪製標準曲線求出標本中M2-PK濃度。 試劑盒組成： 包被有腫瘤M2-PK單克隆抗體(ti) 的酶標板（12ⅹ8孔） 腫瘤M2-PK標準品1→4個(ge)   4×1.0 ml         質控液           1×1.0 ml 腫瘤M2-PK多抗           1×10 ml          酶聯物           2×6.0 ml 濃縮洗滌液（25ⅹ）        1×20 ml          底物A           1×6.0ml 濃縮標本稀釋液（10×）    1×10 ml          底物B           1×6.0ml  終止液                    1×6.0ml 標本的收集： 血漿抗凝劑隻能使用EDTA，其他血漿均不能使用。建議1-2小時內(nei) 離心，避免劇烈搖動。（2000g離心十分鍾）。標本在40C可以保存一天，在-200C可以保存一年。標本收集後若不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存於(yu) -20℃，避免反複凍融。 本試劑盒未提供的其它必需品： 1．   500ml的量筒;  2 ml、5 ml、10 ml的吸管;  酶標儀(yi) （450+10nm）一台 2．   微量加樣器：0-50μl，50-200μl，200-1000μl 實驗步驟： 可行的加樣板設計:   1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A Blank Blank S3 S3 S11 S11 S19 S19 S27 S27 S35 S35 B STD1 STD1 S4 S4 S12 S12 S20 S20 S28 S28 S36 S36 C STD2 STD2 S5 S5 S13 S13 S21 S21 S29 S29 S37 S37 D STD3 STD3 S6 S6 S14 S14 S22 S22 S30 S30 S38 S38 E STD4 STD4 S7 S7 S15 S15 S23 S23 S31 S31 S39 S39 F PC PC S8 S8 S16 S16 S24 S24 S32 S32 S40 S40 G S1 S1 S9 S9 S17 S17 S25 S25 S33 S33 S41 S41 H S2 S2 S10 S10 S18 S18 S26 S26 S34 S34 S42 S42 S1~S42：EDTA血漿標本       Blank：吸入100微升標本洗滌液在A1和A2孔   2 STD：    標準品             PC：  質控液 標準品：在*條和第二條孔中各加入100微升標準品，作為對照實驗 1號標準品=8U/ml             2號標準品=15U/ml 3號標準品=35U/ml            4號標準品=50U/ml 1.        標準品和質控液的準備：向盛有標準品和質控液的小瓶中各加入500μl標本稀釋液，並充分混勻。 2.        質控液： 20U/ml±10%  在F1和F2孔中各加100μl。 3.        標本洗滌液的準備： 20ml濃縮洗滌液（25ⅹ）+400ml蒸餾水，此份稀釋液在4-80C可保存六周。 4.        標本稀釋液的準備： 用蒸餾水按1：10稀釋，稀釋後放2-8℃保存。 5.        酶標板的準備： 在打開之前把酶標板置於室溫，取需要量的酶標板置於框架內，未使用的酶標板於有幹燥劑的密封塑料袋中保存。 6.       EDTA血漿的稀釋（1：100）: 10μl EDTA血漿+1ml標本稀釋液，充分混合。 7.        按照待測標本數目取相應的酶標板條於框架上，除空白孔外，分別將標本和不同濃度的標準品、質控液（100μl/孔）加入相應孔中（做雙孔），振蕩均勻，於370C，溫育60min。 8.        取出反應的酶標板條，倒掉孔內的液體，加入標本洗滌液洗滌5次，於幹淨的紙上拍幹，除去殘留的液體，向每孔中加入M2-PK多抗100μl，振蕩均勻，於370C，溫育30min。 9.        取出反應的酶標板條，倒掉孔內的液體，加入標本洗滌液洗滌5次，於幹淨的紙上拍幹，除去殘留的液體，向每孔中加入酶聯物100μl，振蕩均勻，於370C，溫育30min。 10.     取出反應的酶標板條，倒掉孔內的液體，加入標本洗滌液洗滌5次，於幹淨的紙上拍幹，除去殘留的液體，向每孔中加入A、B底物各50μl，振蕩均勻，於370C，溫育10-15min。 10.  取出反應的酶標板條，立即向每孔中加入50μl終止液，於5分鍾內在450 nm處用酶標儀讀出吸光度。 結果判斷：以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐c標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。 M2-PK參考濃度:≤15U M2-PK/ml  EDTA 血漿 參考濃度≤15U M2-PK/ml  EDTA 血漿，對應90%的參照組除腫瘤病還感染有其他疾病。 含量在15-20U/ml的數值為不確定的可疑血漿。 操作注意事項： 1．   所有的試劑和酶標板在使用之前均要平衡至室溫。 2．   使用前應搖勻所有的液體試劑，但要防止瓶蓋上沾有試劑。 3．   操作時應該按照相同的程序操作和相同的時間間隔。 4．   為了避免汙染，使用幹淨的加樣器吸管和幹淨的容器，不要使用同一個容器來盛裝不同的試劑。 5．   每次洗滌時要倒置酶標板於幹淨的紙巾上拍打，除去殘留液體，避免液體回濺，培養過程中的洗滌每次至少要1分鍾。 6．   加試劑和樣本之後應振蕩酶標板以保證試劑的均勻分布，若有泡沫請用幹淨的針除去。 7．   實驗操作過程中要注意安全，避免皮膚直接接觸標準品、質控液，更不能用嘴吸液，要帶手套，不同批號的材料不要混用。 8．  操作完成要按照說明妥善保管好各種試劑。 注意： 1. 本試驗結果需結合臨床表現、病史及其他診斷結果方可采取適當臨床處理。 2. 2－8℃貯存,貯存至有效期結束；不同批號的試劑不能混用，標本稀釋液及酶聯物不能凍結。本試劑盒有效期九個月。