Greer Labs 屋塵蟎(HDM)過敏原-哮喘模型製備

屋塵蟎過敏原

背景簡介：

支氣管哮喘（bronchial asthma，簡稱哮喘）是一種以嗜酸性粒細胞、肥大細胞反應為(wei) 主的氣道變應性炎症和氣道反應性為(wei) 特征的疾病。由於(yu) 哮喘的發病機製複雜，病因與(yu) 發病機理尚不明了，臨(lin) 床實驗受倫(lun) 理及方法限製，因此需要通過構建哮喘動物模型來研究疾病發生發展以及製定相應治療措施。塵蟎是最常見的空氣過敏原，全球85%的哮喘患者對塵蟎過敏。屋塵蟎是一種免疫複合物，能夠激活先天免疫和後天免疫應答。研究表明，HDM中的蛋白酶，如胰蛋白酶樣酶，催過敏有促進作用，從(cong) 而導致過敏幾天對塵蟎的過敏反應。
利用塵蟎誘發動物建立哮喘模型，方法簡便，操作性強，且成功率高。

美國Greer 公司專(zhuan) 注於(yu) 過敏原檢測，提供各種動物、植物及食品、真菌等各種過敏原提取物。塵蟎過敏原提取物，廣泛應用於(yu) 哮喘模型的製備。

產(chan) 品信息：

英文名稱：D.pteronyssinus

中文名稱：屋塵蟎

貨號：XPB82D3A2.5  XPB82D3A25  XPB91D3A2.5  XPB91D3A25    XPB81D3A2.5  XPB81D3A25

規格：2.5ml/25ml

產(chan) 品應用：

1.該產(chan) 品為(wei) 凍幹粉,一般推薦客戶參照COA中的蛋白濃度做稀釋，客戶收到貨後用去離子水或蒸餾水稀釋至相應工作濃度或儲(chu) 液濃度。比如：2.5ml包裝的，加入2.5ml水，因為(wei) 每個(ge) 批次的蛋白含量有差異，可根據質檢報告，計算終濃度。客戶也可依據自身實驗要求，稀釋到任意濃度。

2.過敏原稀釋後，如果一次用不完，推薦分裝後-20℃保存（可分裝成使用濃度後保存）。可凍融一次，解凍後，在一周內(nei) 用完。

3.凍幹粉過敏原效期為(wei) 10年。

4.常見的兩(liang) 個(ge) 比較相似的產(chan) 品：B82 和B84，B82 和B84，均隻代表D.pteronyssinus，不是實際訂貨貨號，D.pteronyssinus產(chan) 品分粗製品和凍幹粉，實貨都是凍幹粉。凍幹粉是粗品進一步純化後的產(chan) 品。B82和B84在粗品階段，隻在純度上有細微差別,貨號分別為(wei) ：RMB82M 和RMB84M。凍幹粉的D.pteronyssinus隻有XPB82D3A2.5這一個(ge) 貨號（是由粗品RMB82M純化後獲得。）

參數說明：

收到貨後，會(hui) 有隨貨的質檢報告（COA）。塵蟎過敏原會(hui) 有4個(ge) 參數說明，其他類過敏原，如食物、花粉類等過敏原隻有2個(ge) 參數（幹重和蛋白含量）說明。

以XPB82D3A2.5(Lot#385930)為(wei) 例，參數說明：

1）純過敏原（Der P1）： 是指純過敏原Der P1 的含量（當然這個(ge) 提取物的組分不隻是隻有Der P1,也有其他形式的，這個(ge) 是主要的過敏原成分）。154.17mcg/vial 表示 Der P1 的含量是：154.17ug/瓶，mcg, microgram 微克的縮寫(xie) 。

2）幹重（Dry Weight）: 幹重16.7mg,  是去除水分後，瓶子裏粉末的含量。

3）總蛋白（Protein） ：蛋白含量4.43mg， 是指：過敏原提取物的總蛋白含量。

4）內(nei) 毒素含量（Endotoxin）：內(nei) 毒素水平。塵蟎有一款低內(nei) 毒含量（做過內(nei) 毒素處理），貨號為(wei) ：XPB91D3A2.5/ XPB91D3A25（之前XPB70D3A2.5/ XPB70D3A25已停產(chan) ），要比未做過內(nei) 毒素處理的XPB82D3A2.5/ XPB82D3A25內(nei) 毒素含量相對低很多（並不是不含內(nei) 毒素）。

低內(nei) 毒素的一般用於(yu) 做細胞實驗，但由於(yu) 凍幹過程中無法保證無菌，如果做細胞實驗，請做過濾除菌（0.22 um ）。

注意：

1）塵蟎是提取物，提取物是混合物，不是純蛋白。由於(yu) 工藝和每批過敏原原料差異，因此每個(ge) 批次含量（參數）都不同。如果對含量有要求，特別是之前用過別的批次的，沒法保證和之前批次一致，請核對收到貨的COA，確認符合您的要求再開瓶。

2）過敏原提取物是混合物，不能作為(wei) 標準品，如ELISA實驗中的標準品。

3）參考文獻中用過Greer 產(chan) 品的，都沒有具體(ti) 的是參照哪個(ge) 參數？而且不同文獻用量差別也很大，因此沒有標準的方案推薦。客戶需要根據自己的實驗摸索最佳的實驗條件。

如果以純過敏原（Der P1）的含量為(wei) 基準，成本太高。

如果以：幹重（Dry Weight）的含量為(wei) 基準，實際其中的過敏原的比例太低，不足以致敏。

根據客戶實際使用經驗，客戶驗證過參照Protein 含量做是可以的，因此我們(men) 一般推薦客戶以“蛋白含量 Protein"為(wei) 基準，具體(ti) 實驗條件客戶需要自己摸索。

關(guan) 於(yu) 稀釋、保存。

1) 過敏原提取物均為(wei) 幹粉包裝，不是液體(ti) 包裝。規格裏的2.5ml 或25ml 指的是瓶裝規格。

客戶可以根據實際工作濃度，用蒸餾水稀釋到儲(chu) 液濃度，比如：蛋白含量是：4.43mg，用：2.5ml 蒸餾水稀釋後，濃度就是：4.43mg/2.5ml=1.772mg/ml。

2) 塵蟎幹粉效期是10年，幹粉室溫或4℃保存。稀釋後分裝-20℃凍存（保證濃度在：0.1mg/ml以上），效期1年。

注意事項：

1.  蛋白含量不是重量， 不要用天平去稱量，這個(ge) 蛋白含量的測定COA裏有說明，是Bradford法測定的，請不要用天平去稱量。如果用天平去稱量了，會(hui) 導致無法定量，請不要做此操作。例如：您要用50ug 的量，那您可以根據您稀釋後的濃度（比如：1.772mg/ml），可以根據這個(ge) 算出您取多少體(ti) 積的量就可以了。這樣是可以準確定量的。

2.  玻璃瓶易碎，請不要置於(yu) -80℃保存。

結果示例：

產(chan) 品引用文獻：

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