Hypoxyprobe 缺氧探針檢測試劑盒

Hypoxyprobe 缺氧探針檢測試劑盒

 
Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）是一家致力於(yu) 為(wei) 氧代謝紊亂(luan) 引起的惡性和正常組織疾病提供診斷和治療工具的小公司。位於(yu) 美國馬塞諸薩州伯靈頓（121 Middlesex Turnpike, Burlington, Massachusetts, USA 01803），屬於(yu) 美國天然藥物公司（Natural Pharmacia International, Inc.，NPI）缺氧探針部門的衍生公司。 Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）的成立起源於(yu) James Raleigh教授（任職於(yu) 查珀爾希爾（Chapel Hill）北卡羅萊納大學放射腫瘤學部門）和NPI（當時位於(yu) 北卡羅萊納Research Triangle Park）之間的合作。起初的合作著重於(yu) 腫瘤缺氧的臨(lin) 床研究。NPI大規模生產(chan) 缺氧探針Pimonidazole HCl，而James Raleigh教授提供保護的抗體(ti) ，特異性檢測人腫瘤上結合Pimonidazole的缺氧細胞。
總體(ti) 來說，使用Pimonidazole HCl作為(wei) 缺氧標記物，用在狗、大小鼠上的臨(lin) 床前研究越來越受科研圈的關(guan) 注。2002年NPI授權五年給Chemicon公司銷售缺氧探針試劑用於(yu) 動物研究。2006年預測到市場對缺氧探針試劑的擴張需求，NPI終止chemicon授權並成立Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）以開發更且更寬廣的試劑用於(yu) 動物和臨(lin) 床研究。
  如今的Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）專(zhuan) 注於(yu) 研發非侵略性的缺氧標誌物（Hypoxia maker）和缺氧依賴性的細胞因子，所有產(chan) 品皆基於(yu) Pimonidazole核心結構來開發。
特色產(chan) 品：
HypoxyprobeTM-1 Kit 缺氧探針檢測試劑盒。
關(guan) 鍵詞：
Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）；Pimonidazole HCl；缺氧標誌物（Hypoxia maker）；Chemicon Inc.； 
產(chan) 品應用： 
免疫化學法檢測細胞和組織缺氧情況，包括免疫熒光（IF），免疫過氧化物酶，WB或流式細胞分析（FC）；
試劑盒組分：

試劑盒組分詳細描述： 
一、Hypoxyprobe-1 
Hypoxyprobe-1是2-硝基咪唑的替代物，其化學名和成分是Pimonidazole hydrochloride（Pimonidazole HCl），分子量為(wei) 290.8，水溶性為(wei) 400mM（=116 mg/ml），紫外吸收（324nm）的吸光係數為(wei) 7020（0.9%生理鹽水）。
Hypoxyprobe-1的粉末和溶液形式皆具化學穩定性。比如，固體(ti) 形式的Hypoxyprobe-1於(yu) 柔弱光線下室溫保存2年，UV和HPLC分析法評估無任何降解發生。溶於(yu) 0.9%生理鹽水的Hypoxyprobe-1，濃度100g/L置於(yu) 2-8℃保存4.5年，UV和HPLC分析法評估無任何降解發生。
作用機理：缺氧細胞中Pimonidazole被還原後得以活化。這一活化的中間物與(yu) 蛋白質、多肽和氨基酸中的巰基基團（thiol groups）形成穩定的加合物。Mab1抗體(ti) 結合這些加合物從(cong) 而能借由免疫化學法來檢測。
二、MAb1抗體(ti)  
MAb1是小鼠IgG1單克隆抗體(ti) （克隆4.3.11.3），為(wei) 雜交瘤細胞克隆4.3.11.3表達液過濾除菌後得到的上清液，含60μg/ml MAb1和0.15%疊氮鈉。
感興(xing) 趣組織可用免疫組化檢測（IHC），冰凍切片或者福爾馬林固定的石蠟包埋切片；也可組織降解後用流式分析法檢測；或用WB檢測。典型情況下，MAb1抗體(ti) 經1:50稀釋後，取100μl到組織切片上。然後加合適的二抗方法來檢測Pimonidazole加合物。
使用指南： 
1、 Animal Studies 動物研究 
研究正常或腫瘤組織缺氧首先通過靜脈注射（intravenous infusion）、腹腔注射（intraperitoneal injection）或口服（oral ingestion）法給Hypoxyprobe-1溶液，劑量為(wei) 60mg/kg體(ti) 重。比如，25g小鼠的探針用量為(wei) 1.5mg/隻小鼠。（高達400mg/kg的劑量用於(yu) 小鼠無可見毒性或引起組織缺氧變化，但60mg/kg以低成本給予良好的染色結果）。
給藥後，Hypoxyprobe-1分布到包括大腦的所有組織，且僅(jin) 僅(jin) 在氧濃度≤14μM（相當於(yu) pO2=10mm Hg，37℃）的細胞內(nei) 與(yu) 蛋白質巰基形成加合物。除了腫瘤之外，正常組織如肝髒、腎髒和皮膚含pO2等於(yu) 或低於(yu) 10mm Hg的細胞，也會(hui) 結合Hypoxyprobe-1。
2、Tissue cultures 組織培養(yang)  
通常情況下，細胞懸液置於(yu) 含100-200μM Hypoxyprobe-1的缺氧環境中孵育1-2h。之後細胞離心塗片、固定、MAb1和顯色或熒光二抗染色。