質粒提取簡介及問題分析

一、導論質粒提取的原理:轉自複旦大學一位老師的帖子，後麵是方法介紹堿裂解法從(cong) 大腸杆菌製備質粒，是從(cong) 事分子生物學研究的實驗室每天都要用的常規技術。可是我收研究生十幾年了，幾乎毫無例外的是我那些給人感覺什麽(me) 都知道的學生卻對堿法質粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因為(wei) 《分子克隆》裏麵隻講實驗操作步驟，而沒有對原理進行詳細的論述。這是導致我的學生誤入歧途的主要原因。後來我發現其實是整個(ge) 中國的相關(guan) 領域的研究生水平都差不多，甚至有很多“老師”也是這個(ge) 狀態。這就不得不讓人感到悲哀了...

常用熒光染料的激發和發射波長

FluorescentDye（熒光染料）Excitation（激發波長，nm）Emission（發射波長，nm）Cy2489506GFP（RedShifted）488507YO-PRO-1491509YOYO-1491509Calcein494517FITC494518FluorX494519Alexa488490520Rhodamine110496520ABI,5-FAM494522OregonGreen?500503522OregonGreen?488496524Rlbo...

DEAE-Sephadex A-50柱層析純化免疫球蛋白

（一）原理DEAE-SephadexA-50（二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50）為(wei) 弱堿性陰離子交換劑。用NaOH將CL-型轉變為(wei) OH-型後，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白屬於(yu) 中性蛋白（等電點為(wei) PH6.85～7.5），其餘(yu) 均屬酸性蛋白。在PH7.2～7.4的環境中，酸性蛋白均被DEAE-SephadexA-50吸附，隻有γ球蛋白不被吸附。因此，通過柱層析γ球蛋白便可在洗脫中先流出,而其他蛋白則被吸附在柱上,從(cong) 而便可分離獲得純化的IgG。DEAE-sephadexA-50柱層析是...

淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術

1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產(chan) 生抗體(ti) ，又可無限增殖，從(cong) 而創立了單克隆抗體(ti) 雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅(jin) 為(wei) 醫學與(yu) 生物學基礎研究開創了新紀元，也為(wei) 臨(lin) 床疾病的診、防、治提供了新的工具。製備單克隆抗體(ti) 包括動物免疫、細胞融合、選擇雜交瘤、檢測抗體(ti) 、雜交瘤細胞的克隆化、凍存以及單克隆抗體(ti) 的大量生產(chan) ，要經過幾個(ge) 月的一係列實驗步驟，下麵按照製備單克隆抗體(ti) 的流程順序，逐一介紹其實驗方法。細胞融合前準備細...

免疫血清的製備

撰稿李恩善免疫血清的製備是一項常用的免疫學實驗技術。價(jia) 、高特異性的免疫血清可作為(wei) 免疫學診斷的試劑（如用於(yu) 製備免疫標記抗體(ti) 等），也可供特異性免疫治療用。免疫血清的效價(jia) 高低取決(jue) 於(yu) 實驗動物的免疫反應性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強的抗原刺激高應答性的機體(ti) ，常可獲得價(jia) 的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫時，則需同時加用佐劑以增強抗原的免疫原性。免疫血清的特異性主要取決(jue) 於(yu) 免疫用抗原的純度。因此，如欲獲得高特異性的免疫血清，必須予先純化抗原。此外，抗原的劑量、免疫途徑及注射抗原的時間...

薄基底膜腎病Ⅳ型膠原α鏈分布的免疫組化研究

薄基底膜腎病Ⅳ型膠原α鏈分布的免疫組化研究張承英朱世樂(le) 章友康鄭欣鄂潔侯平薄基底膜腎病（TBMN）是以持續性鏡下血尿為(wei) 主要表現的一種遺傳(chuan) 性腎病，腎小球基底膜（GBM）彌漫性變薄為(wei) 該病惟一重要的病理學特征。既往關(guan) 於(yu) Alport綜合征（Alportsyndrome,AS），另外一種以持續性鏡下血尿,GBM變薄增厚、撕裂、分層為(wei) 特征的遺傳(chuan) 性腎病，Ⅳ型膠原α鏈分布的免疫組化研究較多，眾(zhong) 多研究表明,AS患者腎小球基底膜Ⅳ型膠原α3、α4、α5鏈表達缺陷［1］,而關(guan) 於(yu) 薄基底膜腎病Ⅳ型膠原α...

聯合檢測血清和腹水IL-6、IL-2、TNF-α對肝硬化合並SBP的診斷價值

趙彩彥劉金星王淑琴甄真周俊英采用ABS-ELISA法（藥盒由比利時Innogentics公司提供）和雙抗體(ti) 夾心ELISA法（藥盒由法國Immunotech公司或軍(jun) 事醫學科學院提供）對46例肝炎肝硬化進行了血清和腹水中IL-6、IL-2、TNF-α的測定。與(yu) 正常對照組比較，肝炎肝硬化患者血清和腹水IL-6、TNF-α水平明顯升高，IL-2水平明顯降低。合並自發性腹膜炎（SBP）患者血清IL-6、TNF-α水平為(wei) （33.19±12.31）ng/L,（11.73&pl...

白細胞介素-2的研究進展及應用

隨著分子生物學、免疫學理論和技術的發展，運用重組表達技術來生產(chan) 預防和治療疾病的製品已成為(wei) 近幾年研究的熱點。白細胞介素-2是一種具有廣泛生物學活性的細胞因子，它能夠有效地提高免疫功能，醫學上已用於(yu) 預防和治療一些常規方法難以治療的疾病，如腫瘤等；在獸(shou) 醫方麵因其能提高疫苗的免疫效果，尤其是在基因工程亞(ya) 單位苗的免疫效果而倍受重視，展現出廣闊的應用前景。一、白細胞介素-2的受體(ti) 及其生物學功能：白細胞介素-2（IL-2）是一種zui早發現的具有廣泛生物活性的細胞因子，在1979年第二屆淋...